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植物跨膜蛋白提取试剂盒图片
产品货号:
HR8034
中文名称:
植物跨膜蛋白提取试剂盒
英文名称:
Plant transmembrane protein extraction kit
产品规格:
50T|100T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价

本产品是一种基于化学方法的高产跨膜蛋白提取试剂盒。植物跨膜蛋白提取试剂盒可以从各种植物样本中提取跨膜蛋白,可用于纯化蛋白的粗品制备及跨膜蛋白制备。提取过程简单方便。该试剂盒含有蛋白酶抑制剂混合物和磷酸酶抑制剂混合物,阻止了蛋白酶对蛋白的降解,为提取高质量的蛋白提供了保证。


本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。本试剂盒中不含有EDTA,与金属螯合层析等下游应用兼容。本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。


本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分,不可直接用于2D电泳,需要除盐后再用于2D电泳。如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳,请使用其他货号的试剂盒(HR0177)。




  • 将蛋白提取的时间缩短至1小时。
  • 含蛋白稳定剂,提取的蛋白稳定。
  • 紫外检测蛋白浓度时,背景干扰低。
  • 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂;每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性,包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。



组分50T100T
试剂A:植物跨膜蛋白提取液A25mL50mL
试剂B:植物跨膜蛋白提取液B250μL500μL
试剂C:跨膜蛋白溶解液C10mL20mL
试剂D:蛋白酶抑制剂混合物100μL200μL

保存:蛋白酶抑制剂-20℃保存,蛋白提取液、溶解液2~8℃保存,有效期1年。


  • 蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2~8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
  • 蛋白酶抑制剂在2~8℃低温时是固体状态,从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。



移液器、离心机、振荡器、匀浆机/匀浆器、涡旋混匀器、PBS、蛋白定量试剂盒


● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
● 实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
● 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀,不影响使用,溶解后正常使用。
● 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
● 提取液A在使用前需一直置于2~8℃保存,否则下游膜蛋白提取时会导致不容易分层。


  • 每500μL提取液A中加入2μL蛋白酶抑制剂混合物,充分混匀后置冰上备用。
    注:
    ● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液,蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
    ● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完,再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
  • 取洗净擦干后并去除叶梗和粗脉的100~200mg植物组织样本用手术剪刀尽可能剪碎。
  • 加入500μL提取液A,用匀浆机/匀浆器充分匀浆。
    注:
    ● 也可以用液氮研磨处理后加入提取液A。
    ● 没有液氮研磨条件也可以直接加入冷的提取液A在冰上研磨处理。
    ● 如果组织样品很细小,可以剪碎后直接加入提取液2~8℃振荡,可以不用匀浆器。
  • 将匀浆移入另一个预冷的干净离心管中在2~8℃条件下振荡1~2小时。
    注:
    ● 如果没有2~8℃持续振荡条件,也可直接置2~8℃静置1~2小时,中间每隔10分钟涡旋振荡混匀即可。
  • 将提取液在2~8℃低温下10000×g离心5分钟,取上清。
  • 在上清中加入5μL提取液B,充分混匀。
  • 在37℃水浴10分钟。
  • 在37℃ 1000×g离心3分钟。
    注:
    ● 此步骤必须37℃条件下离心。
    ● 如果离心机不可温控,可以不离心,延长上一步骤水浴时间,至溶液分层清晰即可。或者在室温条件下离心,缩短离心时间至1分钟。
  • 此时溶液分为两层,小心移除上层,留着管底部下层大约30~50μL液体。
    注:
    ● 下层为粘稠状液体。
    ● 含叶绿体的植物样本下层跨膜蛋白为黄绿色。通常不影响下游应用。
    ● 如果需要去除其中的叶绿素,可以联系我们购买叶绿素去除试剂。
  • 用50~150μL冷的膜蛋白溶解液C溶解下层溶液,即得跨膜蛋白样品。
    注:
    ● 膜蛋白如果不能很快溶解混匀,可以在加入溶解液后稍微吹打混匀,然后置于4℃冰箱静置10分钟。静置后取出再次用移液器稍微吹打混匀即可。
    ● 如果4℃静置10分钟后仍未有效混匀,可以稍微延长静置时间。
  • 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
    注:
    ● 建议用BCA法进行蛋白定量。
    ● 蛋白样品-80℃存放一年没问题。注意不要被蛋白酶水解掉,不要被细菌污染。



  • 蛋白浓度低?
    跨膜蛋白丰度较低,需要尽可能加大细胞上样量。处理部分组织样本时可能没有裂解完全,导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理,没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
  • 用什么方法定量蛋白?
    建议用BCA法。不适合用Bradford法,因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份,导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系,则可以用Bradford法定量。
  • 提取的蛋白具有活性吗?
    本试剂盒不含有离子型去垢剂组份,不破坏蛋白的结构,没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏,蛋白均保持其天然构象和活性。

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